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A Dans le processus de configuration du système, les composants tels que les amorces et les enzymes sont en excès, mais les modèles ne sont pas en excès.Les molécules d'ADN matrice entrent au hasard dans chaque petit système réactionnel.Après l'amplification par PCR, le système contenant la matrice termine l'amplification et le système ne contient pas la matrice sans amplification.
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A Cause : La souche est mutée et la sonde actuelle n'est pas adaptée à la détection ;l'acide nucléique provoqué par la méthode d'extraction (absence d'extraction complète des bactéries, champignons, etc. inclus dans l'échantillon) ne peut pas être détecté ;
Vérification de l'exclusion : L'extraction de l'ADN de la culture, suivie d'une amplification avec nos sondes, peut être vérifiée ;il est recommandé que l'hémoculture et le test d'acide nucléique soient le même échantillon de sang.
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A Norme de jugement ≥ 3 gouttelettes positives, mais pour les gouttelettes positives au point critique, il est nécessaire d'effectuer une analyse approfondie en combinaison avec des matériaux de contrôle de qualité négatifs/positifs .Lorsqu'il y a une ligne verticale de signaux, elle est considérée comme un signal non positif.
échantillons à faible concentration, un tampon multiple plus élevé peut être sélectionné pour l'ajustement du chargement de l'échantillon .
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A Plasma : ≥ 2 ml est recommandé, les composants sont relativement simples et la contamination de l'ADN humain est supprimée.La composition d'acide nucléique est plus simple et la concentration d'acide nucléique bactérien est plus élevée, ce qui est pratique pour la détection.
Remarque : La vitesse de rotation ne doit pas être trop élevée pendant la centrifugation, sinon cela entraînera facilement la perte de bactéries intracellulaires et affectera le résultat final du test ;
Sang total : ≥ 4 ml est recommandé, les composants sont relativement complets et la cohérence avec les échantillons d'hémoculture est bonne, mais il y a contamination de l'ADN humain .
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A Bactéries (bactéries Gram-positives, bactéries Gram-négatives), champignons invasifs, virus.Dans le même temps, la détection des gènes de résistance aux médicaments peut également être effectuée.
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A Il est recommandé de mettre en place une expérience de contrôle pour la division.Lorsqu'il n'est pas défini, utilisez généralement l'intensité de fluorescence de 3000 comme point de seuil ou utilisez le cluster négatif comme référence pour juger du positif.Vous pouvez vous référer à l'expérience de la cytométrie en flux pour faire une division.
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A La quantification de la fluorescence est basée sur la courbe d'amplification.Le signal de détection de chaque cycle sera calculé par le logarithme de 2 à la puissance N, qui ne peut être utilisé que pour distinguer la différence de plus de 2 fois.Le système de PCR numérique peut détecter des différences d'expression génique aussi faibles que 0,1 fois par la formule de calcul de la distribution de Poisson .
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A Pour la fréquence de mutation, la PCR numérique peut atteindre 0,01 % ou moins, et une seule copie peut être obtenue pour les micro-organismes ;La RT-PCR ne peut atteindre que 1 %.
