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A Dans le processus de configuration du système, les composants tels que les amorces et les enzymes sont en excès, mais les modèles ne sont pas en excès. Les molécules d'ADN matrimoniales entrent au hasard dans chaque petit système de réaction. Après l'amplification PCR, le système contenant le modèle termine l'amplification et le système ne contient pas le modèle sans amplification.
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A Cause: la souche est mutée et la sonde de courant ne convient pas à la détection; L'acide nucléique causé par la méthode d'extraction (échec à extraire complètement les bactéries, les champignons, etc. inclus dans l'échantillon) ne peut pas être détecté;
Vérification d'exclusion: l'extraction d'ADN de la culture, suivie d'une amplification avec nos sondes, peut être vérifiée; Il est recommandé que l'hémoculture et les tests d'acide nucléique soient le même échantillon de sang.
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A Norme de jugement ≥ 3 gouttelettes positives, mais pour les gouttelettes positives au point critique, il est nécessaire d'effectuer une analyse en profondeur en combinaison avec des matériaux de contrôle de qualité négatifs / positifs. Lorsqu'il y a une ligne verticale de signaux, il est jugé comme un signal non positif.
Des échantillons à faible concentration, un tampon multiple plus élevé peut être sélectionné pour le réglage de la charge des échantillons.
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A Plasma: ≥ 2 ml est recommandé, les composants sont relativement simples et la contamination de l'ADN humain est supprimée. La composition de l'acide nucléique est plus simple et la concentration de l'acide nucléique bactérien est plus élevée, ce qui est pratique pour la détection.
Remarque: La vitesse rotative ne doit pas être trop élevée pendant la centrifugation, sinon elle entraînera facilement la perte de bactéries intracellulaires et affectera le résultat du test final;
Sang total: ≥4 ml est recommandé, les composants sont relativement complets et la cohérence avec les spécimens d'hémoculture est bonne, mais il y a une contamination de l'ADN humain.
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A Bactéries (bactéries gram-positives, bactéries à Gram négatif), champignons invasifs, virus. Dans le même temps, la détection des gènes de résistance au médicament peut également être effectuée.
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A Il est recommandé de mettre en place une expérience de contrôle pour la division. Lorsqu'il n'est pas défini, utilisez généralement l'intensité de fluorescence de 3000 comme point de seuil, ou utilisez le cluster négatif comme référence pour juger le positif. Vous pouvez vous référer à l'expérience de la cytométrie en flux pour faire une division.
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A La quantification de la fluorescence est basée sur la courbe d'amplification. Le signal de détection de chaque cycle sera calculé par le logarithme de 2 à la puissance N, qui ne peut être utilisé que pour distinguer la différence de plus de 2 fois. Le système PCR numérique peut détecter les différences d'expression génique aussi faibles que 0,1 fois par la formule de calcul de la distribution de Poisson.
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A Pour la fréquence de mutation, la PCR numérique peut atteindre 0,01% ou moins et une copie unique peut être obtenue pour les micro-organismes; RT-PCR ne peut atteindre que 1%.
