Questions et réponses sur le système de PCR numérique RainSure Droplet

1. Échantillons d'ADN :
OD260/280 = 1,6-1,8
Concentration ≥ 10 ng/μL
Volume ≥ 10 μL
Expédié sur glace (ice packs)

2. Échantillons d'ARN :
OD260/280 = 1,8-2,0
Concentration ≥ 20 ng/μL
Volume ≥ 20 μL
Expédié sur glace (neige carbonique)

3. Amorces ddPCR :
Concentration = 450 nM-900 nM

4. Sonde ddPCR :
Concentration = 250 nM

1. Exécutez le fichier d'installation en mode administrateur

2.Définissez l'anglais comme langue par défaut

Concentration d'échantillon extrêmement faible.Pour les cas limites positifs, il est nécessaire d'effectuer une analyse approfondie en combinaison avec des matériaux de contrôle de qualité négatifs/positifs

La ou les souches cibles peuvent avoir été mutées, faible efficacité d'extraction des acides nucléiques.

Pour l'utilisation de réactifs tiers, il est nécessaire d'optimiser et de vérifier avec le système RainSure dPCR.Certains paramètres incluent la concentration des amorces et des sondes, la compatibilité enzymatique avec l'huile de génération de gouttelettes RainSure et le profil de cycle thermique.

Ceci est largement lié à une erreur expérimentale (de manipulation).Il est recommandé de placer la pipette verticalement avec la pointe contre le fond du puits d'échantillon dans la cartouche lors de l'ajout du mastermix pour éviter de créer des bulles d'air dans le puits d'échantillon.Si des bulles d'air apparaissent dans le puits d'échantillon, de grosses bulles seront créées lors de la génération de gouttelettes, ce qui réduira le nombre de gouttelettes.

N'oubliez pas non plus de toujours ajouter de l'huile en premier, puis d'ajouter le mastermix pour garantir la réussite de la génération de gouttelettes.Néanmoins, il est toujours important d'examiner les marchandises à la réception et de surveiller votre température de stockage pour exclure une qualité compromise en raison de la logistique et du stockage.

1. La puce est laissée trop longtemps (> 10 minutes) après l'ajout d'huile de génération de gouttelettes

2. Introduction de bulles lors de l'ajout de l'échantillon
3. Précision de pipetage

4. Ne pas ajouter d'huile mais mélanger d'abord