Droplet Digital PCR (DDPCR)

La réaction en chaîne de la polymérase numérique (DPCR) est un raffinement biotechnologique des méthodes de réaction en chaîne en polymérase conventionnelles qui peuvent être utilisées pour quantifier directement et amplifier clonalement les brins des acides nucléiques, y compris l'ADN, l'ADNc ou l'ARN. La principale différence entre le DPCR et la PCR traditionnelle réside dans la méthode de mesure des quantités d'acides nucléiques, la première étant une méthode plus précise que la PCR. Comme la PCR, dans le DPCR, une seule réaction est également effectuée dans un échantillon, mais l'échantillon est divisé en de nombreuses partitions, la réaction étant effectuée dans chaque partition séparément. Avec cette division, des quantités d'acide nucléique peuvent être collectées et mesurées plus précisément et avec sensibilité. La technique est régulièrement utilisée pour l'amplification clonale des matériaux pour le séquençage de nouvelle génération et s'est révélé bénéfique pour l'analyse des changements dans les séquences de gènes, y compris les variantes du nombre de copies et les mutations ponctuelles. Droplet PCR numérique (DDPCR) est une technique pour le DPCR dans laquelle une réaction d'échantillon de 20 microliter est divisée en 20 000 gouttelettes d'huile de taille nanolitre en utilisant une technique d'émulsion à eau-eau, thermocyclé dans un puits de cartouche microfluidique, et l'amplitude de fluorescence de chaque goutte de goutte dans chaque puits d'échantillon est lu à l'aide d'un scanner de gouttelettes.
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Applications de Droplet Digital PCR

Diagnostic clinique

· Détection qualitative / quantitative des micro-organismes pathogènes infectieux (en particulier les micro-organismes à faible copie), détection de mutation dans le gène de résistance aux agents pathogènes, typage et identification des agents pathogènes.
· Variation des gènes liés à la tumeur / au cancer (mutation, fusion, méthylation, CNV, etc.) pour le dépistage précoce du cancer, le diagnostic des compagnies, la thérapie médicamenteuse ciblée, l'orientation du traitement, la surveillance et l'évaluation de l'efficacité du traitement.
· Dépistage prénatal non invasif, détection de maladies génétiques néonatales telles que l'hypothyroïdie congénitale et la phénylcétonurie.

Surveillance environnementale

· Détection de micro-organismes complexes et à faible abondance dans l'eau, le sol, le gaz et d'autres composants.
· Détection des micro-organismes pathogènes infectieux résistants aux médicaments dans les quartiers, laboratoires, hôpitaux et autres surfaces environnementales.
 

Sécurité alimentaire

· Détection de micro-organismes pathogènes / non pathogènes dans les aliments tels que les produits laitiers.
· Échantillonnage et inspection des aliments, tels que la falsification de la viande et les ingrédients alimentaires génétiquement modifiés.
 

Biopharmaceuticals / Gene Thérapie

· Évaluation de l'efficacité de l'édition des gènes.
· Évaluation de la sécurité biologique des vaccins et des anticorps pour les résidus des substances dérivées de l'hôte.
· Évaluation de l'efficacité des médicaments.

Science légale

· Identification et quantification des espèces des échantillons.
· Analyse des marqueurs génétiques pour
identification.
· Analyse des preuves traces et inférence du temps de décès.
 
 
 

Agriculture

· Identification des espèces génétiquement modifiées.
· Analyse des gènes de résistance au stress.
· Recherche sur les différences génétiques entre les espèces.
· Brassement végétal.
· Détection / identification de la source de maladies, telles que l'identification des parasites et des micro-organismes pathogènes.
 

Préparation de matériaux standard

· Quantification et contrôle de la qualité des matériaux de référence.
 
 
 
 
 
 
 

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