Nombre Parcourir:0 auteur:Éditeur du site publier Temps: 2024-11-13 origine:Propulsé
-Facilite dans la véritable mise en œuvre rapide de la technologie PCR numérique dans le champ NIPT
Au milieu de l'octobre 2024, le Chinese Journal of Medical Genetics, Volume 41, numéro 10, a publié un article intitulé 'Expert Consensus sur l'application de la technologie de dépistage prénatal non invasive numérique PCR pour le dépistage des troubles chromosomiques fœtaux ' ( https://rs.yiigle.com/cmaid/1517121 , Doi: 10.3760 / cma.j.cn511374-20240318-00176). Le consensus élabore sur les aspects pertinents du DPCR-NIPT, notamment: les exigences de base, la portée de l'application, le processus de pré-test, le processus de test, l'interprétation des rapports, le conseil génétique et les limites de la technologie.
L'image de l'équipement de PCR numérique publié dans le consensus d'experts est l'image originale de l'instrument de la série Dropdx Scientific Dropdx Rainsure, et les détails peuvent être trouvés dans la section d'équipement et d'affichage des produits du site Web Scientific Waincy ( https://www.rainurebio.com ).
L'aneuploïdie du chromosome fœtal est une composante majeure des tests de dépistage prénatal, ce qui est bénéfique pour promouvoir l'eugénisme et améliorer la qualité de l'accouchement par le dépistage prénatal précoce et le diagnostic. Les tests prénatals aneuploïdes sont une approche technologique non invasive, minimalement invasive ou invasive qui examine les femmes enceintes pendant un certain temps pour évaluer le risque de troubles aneuploïdes chromosomiques fœtaux ou pour confirmer davantage le diagnostic. Les méthodes de diagnostic prénatal conventionnelles sont invasives, avec une amniocentèse, un échantillonnage des villages choriales et un échantillonnage de ponction des veines ombilicaux pour l'analyse du caryotypage, qui comporte un risque potentiel de fausse couche fœtale ou d'infection. Le dépistage prénatal de routine précoce et mi-trimestre combine un examen échographique avec l'analyse des biomarqueurs sériques, ainsi que des informations cliniques telles que l'âge maternel, l'âge gestationnel, le poids et la présence de diabète, pour calculer la valeur des risques à l'aide du logiciel pour l'évaluation. Cependant, la sensibilité et la spécificité de ces méthodes sont limitées. En 1997, Lo et al. découvert de l'ADN fœtal sans cellule (ADN de CFF) dans le sang périphérique des femmes enceintes, jetant les bases de tests prénatals non invasifs (NIPT) pour l'aneuploïdie du chromosome fœtal. En 2008, Lo et al. Il a en outre démontré la faisabilité de la détection de l'aneuploïdie du chromosome fœtal basée sur l'ADN de CFF dans le plasma maternel et le séquençage du génome à grande échelle.
À ce stade, des tests prénatals non invasifs basés sur le NGS (séquençage de prochaine génération) ont été utilisés dans le dépistage clinique de la trisomie fœtale 21, de la trisomie 18 et des syndromes de trisomie 13, et a démontré une sensibilité, une spécificité et un taux de détection élevées dans des grossesses à haut risque. Cependant, NGS-NIPT est affecté par une variété de facteurs provenant du fœtus, de la mère, du processus de séquençage et de l'analyse des données, ce qui peut entraîner des résultats faussement positifs ou faux négatifs. De plus, le coût des tests NGS-NIPT est coûteux, ce qui rend difficile la mise en œuvre rapide et efficace à grande échelle.
Avec l'introduction de la technologie microfluidique, la PCR numérique (DPCR), qui représente la troisième génération de technologie de PCR, a démontré une efficacité de détection et une sensibilité plus élevées. Il a été démontré que le DPCR a le potentiel d'un développement plus direct, rapide et rentable dans les applications chromosomiques de NIPT d'aneuploïdie. De plus, la combinaison des technologies DPCR-NIPT et NGS-NIPT pour le dépistage peut améliorer encore la précision, la sécurité et la rapidité des tests de dépistage prénatal pour les aneuploïdies chromosomiques fœtales.
De plus, les recommandations liées au consensus sont résumées ci-dessous:
Résumé des recommandations.
[Recommandation 1] Le coût des tests DPCR-NIPT est comparable à celui du dépistage sérologique, tandis que son taux de détection positif est similaire à celui du NIPT, ce qui en fait une alternative prometteuse au dépistage prénatal. Cela pourrait conduire à la formation d'un dépistage prénatal séquentiel et d'une stratégie de diagnostic de 'DPCR-NIPT pour le dépistage initial, NIPT pour le dépistage secondaire et diagnostic prénatal invasif. '.
[Recommandation 2] Il est recommandé de réaliser DPCR-NIPT conformément aux exigences de personnel, d'organisation, de réactifs et d'équipement.
[Recommandation 3] En se référant au dépistage sérologique et au NIPT, le DPCR-NIPT peut être utilisé pour le dépistage simultané de la trisomie 21, de la trisomie 18 et de la trisomie 13. Les combinaisons de trisomie 21, 45, x et 22q11.2ds peuvent également être effectuées à l'aide de DPCR-NIPT.
[Recommandation 4] Il est recommandé que les femmes enceintes subissant un dépistage du DPCR-NIPT soient classées par des populations appropriées, édifiantes et inappropriées, et pour garantir que le consentement éclairé soit obtenu.
[Recommandation 5] Différents laboratoires peuvent établir des procédures de DPCR-NIPT standard localisées et des systèmes de contrôle de la qualité en fonction de leurs propres conditions et procédures pré-test et intra-tests et contrôle de la qualité.
[Recommandation 6] Les critères de détermination du risque de maladies chromosomiques fœtales doivent être basées sur les résultats du DPCR-NIPT.
[Recommandation 7] Des stratégies de conseil génétique et de traitement doivent être fournies pour différents risques suggérés par le test.
[Recommandation 8] Compte tenu des caractéristiques de CFDNA et de DPCR-NIPT, il est recommandé que les institutions médicales établissent un mécanisme rétrospectif de suivi 'Counseling ~' et garantir également que des travaux de suivi appropriés sont effectués.
Concernant les défis techniques de DPCR-NIPT
Instrument: Il existe des exigences strictes pour les performances de l'équipement. Étant donné que les dispositifs de PCR numériques utilisés pour le NIPT doivent faire la différence entre les différences de nombre de copies d'ADN CFF normales et anormales (généralement moins de 4%), elles nécessitent une excellente précision et reproductibilité. Étant donné que la différence du nombre de copies entre l'ADN CFF normal et anormal est à moins de 5%, augmentant le nombre de gouttelettes (c.-à-d. Le numéro de partition) pour amplifier la quantité totale d'ADNc dans l'échantillon peut agrandir la différence dans les nombres de copie d'ADN CFF normaux et anormaux, améliorant ainsi la sensibilité de détection.
Dans une étude de DAI [16], le nombre minimum de gouttelettes requis dans des conditions spécifiques a été calculé. À un CFDNA de 5% (0,05) et un PDR de 30% (0,3), environ 18 000 gouttelettes ou réactions de PCR ont été nécessaires pour distinguer une grossesse aneuploïde d'une grossesse aneuploïde avec un niveau de confiance de 95% (1,96 fois de déviation standard).
Réactifs: Utilisé pour le NIPT nécessite la réalisation de tests multiples, plus les cibles sont précises, plus le test est précis. Le principe du réactif est d'amplifier la différence du nombre de copies entre des échantillons fœtaux normaux et anormaux en détectant plusieurs cibles. Par exemple, en supposant une différence de nombre de copies de 1% entre un fœtus normal et un fœtus anormal, la différence entre 100 copies d'une cible est de 1 copie. Si 10 cibles sont testées, la différence sera mise à 10 copies, ce qui augmentera la sensibilité du test.
Dans l'étude de Lašáková [15], les auteurs ont utilisé 16 paires d'amorces et deux sondes d'acide nucléique de verrouillage marquées par fluorescence pour le chromosome 21 et le chromosome 18, respectivement. Ce test a été validé dans un essai en aveugle sur une gamme de plasma à partir de 30 femmes enceintes à risque de Trisomy 21 du syndrome de Down. Les résultats du test et les procédures de diagnostic invasives étaient en parfait accord (sensibilité, spécificité, valeur prédictive positive et valeur prédictive négative étaient toutes à 100%). Dans une étude de DAI [16], 10 ensembles de sondes d'amorce ont été utilisés pour les tests multiplexes des chromosomes 21, 18 et 13. Dans une étude de Tan [14], 10 ng de GDNA cassée et différents nombres de paires d'amorces (1, 5, 10 et 20 paires pour Chr21 et Chr18, respectivement) ont été utilisées pour vérifier la relation entre le nombre de paires d'amorces et le nombre de DNA Target. Les résultats ont montré que la quantité de molécules d'ADN cibles détectées dépendait fortement du nombre de paires d'amorces, et que l'augmentation du nombre de paires d'amorces peut augmenter le nombre de molécules d'ADN cibles détectées, compte tenu d'une certaine quantité d'ADN.
La sélection d'équipements de PCR numériques plus sensibles et des réactifs PCR numériques multiplexes et validés conçus et validés est essentiel pour améliorer la sensibilité et la spécificité du test DPCR-NIPT.
À propos de Rainsure Scientific Ltd. Co.
Rainsure Scientific est une entreprise innovante dédiée aux diagnostics de précision. Adhérant à la mission de 'Innovation, Intelligent Manufacturing, Health Promotion ', Rainsure Scientific est principalement engagé dans le développement de plateformes de diagnostic innovantes et de solutions de diagnostic IVD. La société a développé des instruments scientifiques et des produits de diagnostic moléculaire de pointe, notamment des plateformes de recherche microfluidique, des systèmes de PCR numériques et des kits de réactifs de soutien, basés sur les progrès technologiques continus de la société dans les domaines de la microfluidique et de la fabrication intelligente. Les membres de l'équipe fondateurs de l'entreprise sont tous diplômés des universités de la Ivy League et ont travaillé pour un certain nombre de fabricants de sciences de la vie reconnus internationalement, avec une riche expérience de l'industrie et des perspectives de pointe. Rainsure Scientific s'engage à autonomiser les clients avec une technologie innovante et une fabrication intelligente pour favoriser le développement de l'industrie des soins de santé.
