Huile de génération de gouttelettes

Dans la PCR numérique des gouttelettes, l'huile de génération de gouttelettes joue un rôle crucial dans le processus de partitionnement du mélange de réaction de PCR en milliers ou des millions de gouttelettes individuelles. Ces gouttelettes servent de vaisseaux de réaction discrets, chacun contenant une fraction de l'ADN cible ou des molécules d'ARN.

L'huile de génération de gouttelettes est un fluide à base d'huile spécialisé qui est utilisé pour créer et stabiliser les gouttelettes du DPCR. L'huile est inscriptive avec le mélange de réaction de PCR, formant une phase distincte qui entoure et encapsule les gouttelettes du mélange réactionnel. Cette barrière d'huile aide à isoler et à compartimenter chaque réaction de PCR, empêchant la contamination croisée et garantissant une quantification précise des acides nucléiques cibles.

Les caractéristiques clés de l'huile de génération de gouttelettes de la pluviation comprennent:

1. IMMISCIBIBLE: L'huile de génération de gouttelettes est inscriptive avec le mélange de réaction de PCR. Cela garantit que l'huile forme des gouttelettes distinctes, les séparant des gouttelettes du mélange réactionnel.

2. Stabilité: L'huile est stable et maintient ses propriétés physiques pendant le processus de cycle de PCR. Il n'évapore, ne dégrade pas ou ne provoque pas une interférence avec la réaction de PCR.

3. Transparence optique: l'huile a une transparence optique élevée pour permettre une détection et une analyse efficaces des signaux fluorescents générés pendant le DPCR.

4. Inerness: L'huile est chimiquement inerte pour éviter d'interférer avec la réaction de PCR et l'amplification de l'ADN.

Pendant le processus DPCR, l'huile de génération de gouttelettes et le mélange réactionnel sont émulsifiés. Ce processus d'émulsification crée une suspension stable de gouttelettes, chaque gouttelette contenant une seule molécule cible ou aucune. Les gouttelettes générées à l'aide de l'huile de génération de gouttelettes sont ensuite soumises à un cycle thermique, où l'amplification par PCR a lieu. Après amplification, les gouttelettes sont analysées individuellement pour déterminer la présence ou l'absence de la molécule cible en fonction des signaux de fluorescence.

En résumé, l'huile de génération de gouttelettes est un composant critique de la PCR numérique des gouttelettes car elle permet la formation et la stabilisation des gouttelettes individuelles contenant le mélange de réaction de PCR. Il permet le partitionnement précis et l'isolement des acides nucléiques cibles, facilitant une quantification et une analyse précises dans les tests DPCR.