PCR numérique de gouttelettes (ddPCR)

La réaction en chaîne par polymérase numérique (dPCR) est un raffinement biotechnologique des méthodes conventionnelles de réaction en chaîne par polymérase qui peut être utilisée pour quantifier directement et amplifier par clonage des brins d'acides nucléiques, y compris l'ADN, l'ADNc ou l'ARN.La principale différence entre la dPCR et la PCR traditionnelle réside dans la méthode de mesure des quantités d'acides nucléiques, la première étant une méthode plus précise que la PCR.Comme la PCR, dans la dPCR, une seule réaction est également effectuée dans un échantillon, mais l'échantillon est divisé en plusieurs partitions, la réaction étant effectuée dans chaque partition séparément.Avec cette division, les quantités d'acide nucléique peuvent être collectées et mesurées avec plus de précision et de sensibilité.La technique est régulièrement utilisée pour l'amplification clonale de matériaux pour le séquençage de nouvelle génération et s'est révélée bénéfique pour l'analyse des changements dans les séquences de gènes, y compris les variantes du nombre de copies et les mutations ponctuelles.Droplet Digital PCR (ddPCR) est une technique de dPCR dans laquelle une réaction d'échantillon de 20 microlitres est divisée en gouttelettes d'huile de 20 000 nanolitres à l'aide d'une technique d'émulsion eau-huile, thermocyclées dans une cartouche microfluidique, et l'amplitude de fluorescence de chaque gouttelette dans chaque puits d'échantillon est lu à l'aide d'un scanner de gouttelettes.